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Oggetto:
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Biotecnologie cellulari

Codice attività didattica
MFN0385B
Crediti/Valenza
4 - TAF "B"
SSD attività didattica
BIO/06 - anatomia comparata e citologia
Erogazione
Tradizionale
Lingua
Italiano
Frequenza
Obbligatoria
Tipologia esame
Scritto
Tipologia unità didattica
modulo
Oggetto:

Sommario del corso

Oggetto:

Programma

Presentazione di un problema scientifico. Progettazione e realizzazione virtuale di costrutti per rispondere alle diverse domande. Analisi di tutti i passaggi e protocolli che devono essere utilizzati, discussione dei problemi tecnici che si possono incontrare.

Alla fine del corso l'allievo dovrà essere in grado di interrogare banche dati,  progettare un costrutto per l'espressione di una proteina ricombinante, comprendere protocolli sperimentali e istruzioni allegate a kit o reagenti.

Lezioni/esercitazioni in aula informatica:
1. Studio delle sequenze presenti in banca dati riguardanti il cDNA di interesse
2. Disegno dei primers
3. RT-PCR, clonaggio e sequenziamento
4. Analisi delle sequenze ottenute
5. Subclonaggio in vettori di espressione (pEGFP e pIRES-puro2)
6. Subclonaggio in vettore di espressione con coda FLAG all’N o al C terminale per identificazione della proteina
7. Subclonaggio in vettore virale adenoassociato pAAV-MCS
8. Subclonaggio del cDNA con FLAG in vettore virale adenoassociato pAAV-MCS
9. Progettazione esperimenti per testare i costrutti prodotti
Preparazione relazioni finali.

To supply the students with the appropriate knowledge to project different expression vectors, a scientific problem will be explained together with different scientific questions. The students will analyse the possible expression vectors that can be realized to answer to the different questions.
Every lesson will include a theoretic explanation concerning a specific goal, followed by a practical exercise at the computer to reach that objective. 
The students will (virtually) realize different constructs to express: the full length protein, a truncated protein, a protein fused in frame with the green fluorescent protein (GFP), or a TAG at the N or C terminus. The students will use different vectors (plasmidic, adenoassociated-viral, with or without an IRES sequence). The constructs will be projected in detail. During the course, the steps, the protocols, and the possible technical problems will be carefully discussed.
At the end of the course, the students should be able to find out data banks, to project an expression vector and all the necessary steps to obtain it, to design primers, to set up an RT-PCR reaction, a ligase reaction, a restriction enzyme analysis to determinate the insert orientation, to analyse a nucleotide sequence, to understand experimental protocols, and kit or reagent attached instructions, to discuss the experiments that can be realized with the different expression constructs.




Il materiale didattico presentato a lezione è disponibile sul sito internet 
http://biologia.campusnet.unito.it/cgi-bin/home.pl

E’ fortemente consigliato l’utilizzo del seguente materiale per approfondimenti e integrazioni: presentazioni PPT e articoli scientifici dati a lezione.

Infine sono di seguito indicati altri siti internet di interesse:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/
http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php
http://www.bioinformatics.org/annhyb/



Alla fine del corso gli allievi dovranno presentare una relazione dettagliata riguardante l’attività svolta nel laboratorio di informatica e scrivere un progetto di sovraespressione o knock-out (eventualmente inducibile o condizionale) di un determinato gene.
In alcuni casi verrà proposto un breve esame orale per eventuali chiarimenti sulle relazioni.
Chi frequenta meno di 6 lezioni/esercitazioni (su 8) in aula informatica, oltre a presentare la relazione, dovrà sostenere un esame orale.



Non è richiesta nessuna propedeuticità.

La frequenza alle lezioni non è obbligatoria; per i corsi di laboratorio e le attività di esercitazione relative ai corsi la frequenza è obbligatoria e non può essere inferiore al 70% delle ore previste. 

Oggetto:

Note

Per cortesia, chi ha intenzione di seguire il corso quest'anno è pregato di iscriversi a Moodle, grazie!

Registrazione
  • Aperta
    Oggetto:
    Ultimo aggiornamento: 17/09/2014 09:13
    Location: https://lmbiologia.campusnet.unito.it/robots.html
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